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 Mi Primer cultivo In vitro 
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Nota Mi Primer cultivo In vitro
CULTIVO INVITRO
Micropropagación de Plantas Carnívoras, Agosto 2011
Por PATO
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Varias horas de lectura, videos e informacion de amigos que saben, me ayudaron a comprender y sacar mis propias conclusiones sobre el cultivo invitro. Fue entonces cuando decidi encarar mi primer proyecto de cultivo invitro con plantas carnivoras.
Cuando empezar, tipo de concentraciones a utilizar, elementos necesarios y que lugar de la casa era el mas apropiado fueron algunos de los factores a tener en cuenta al momento de encarar el proyecto.
Lo unico que tengo a mi favor es que tengo experiencia y conocimientos sobre las plantas carnivoras y la contra es que no soy botanico ni quimico como para que esto me resulte mas facil.
A continuacion hare la explicacion de cómo hacer la preparacion de un medio de cultivo, esterilizacion del medio, explantos o semillas y por ultimo la introduccion de los mismos en el medio de cultivo.

Estos son algunas de los materiales que son necesarios para comenzar con el cultivo invitro.
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En reemplazo del flujo laminar utilize una caja de acrilico como zona aceptica para trabajar.
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PARTE 1| Preparación del medio de cultivo
Por ser la primer vez prepare solamente 500ml de medio, lo cual me alcanzo para 10 frascos . Estos son los principales elementos para iniciar el medio: MURASHIGE & SKOOG BASAL MEDIUM w/ VITAMINS, Azúcar, Agar Agar, Agua destilada.

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Pesando los componentes para la preparacion del medio de cultivo.
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Preparando el medio.

Una vez que tenemos todo pesado vamos vertiendo los elementos de a uno y revolviendo siempre para evitar la formacion de grumos, por ultimo se agrega el agar agar y seguimos revolviendo hasta que el medio vuelva a tomar su forma cristalina, medimos el ph de la solucion que tiene que estar en 5.5 a 5.7. Si el Ph esta por arriba de esos valores yo uso vinagre blanco para bajar el ph y bicarbonato de sodio para subirlo.

PARTE 2| Esterilizacion de los frascos junto al medio de cultivo
Los frascos que utilize son de yogurt, tienen una capacidad de 200ml y son muy practicos para estos usos.
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Coloque unos 35ml de medio en cada frasco y para hacerlo mas practico utilize una jeringa de 60ml
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Una vez que que tenemos todo los frascos listos con el medio de cultivo vamos a proceder a esterilizarlos mediante la olla a presion, para ello debemos destaparlos apenas para evitar que los frascos revienten o el medio de cultivo salga de los frascos
El procedimiento de esterilizacion es el siguiente, debemos poner los frascos dentro de la olla a presion o autoclave durante 20 minutos a 120ªC, si tenemos olla a presion comenzamos a medir el tiempo una vez que comienze a salir vapor por la valvula.
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Frascos ya esterilizados y listos para ubicarlos dentro de la caja de acrilico esterilizada.
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PARTE 3| Esterilizacion e introduccion de los explantos en el medio de cultivo

Lo mas correcto es seleccionar plantas que sean adultas y esten en muy buen estado. De las mismas seleccionaremos la mejor parte y las hojas mas nuevas. Procedemos a esterilizar o desinfectar los explantos en baños de alcohol al 3%, enjuague en agua destilada esterilizada, baño en hipoclorito de sodio al 70% y nuevamente enjuague en agua destilada esterilizada. Otros ultilizan solamente agua oxigenada para esterilizar los tejidos y menos tiempo de exposicion, creo que este ultimo es el mas correcto por no haber tenido exito con algunas tejidos de heliamphoras, darlingtonias. El alcohol suele deshidratarlos muy rapido al igual que el hipoclorito de sodio.
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Selección de plantas
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Selección de explantos Esterilizacion de los explantos – los frascos a la izquierda son los que contienen alcohol, hipoclorito de sodio y agua dest. esterilizada.
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Explantos ya esterilizados esperando a ser introducidos al medio Introduccion de los explantos
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Cultivo finalizado

Al dia de hoy 21.08.11 despues de 8 dias tuve contaminacion en cinco frascos es decir un 50% de exito por el momento. El resto de los frascos aun no se ve ningun tipo de contaminacion.
Este fue mi primer cultivo invitro, espero tener buenos resultados para poder seguir con el resto del proyecto.
Saludos y Gracias!

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Lun Ago 22, 2011 6:03 am
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
muy bueno! ojalá te funcione :D :D
tengo una duda:
¿como esterilizaste la caja de acrílico?
saludos.

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(....).... Oooo....:Paso A Paso,Planta A Planta,Semilla A Semillas:
...(......(....)...
.._)..... )../....
.......... (_/.....

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Lun Ago 22, 2011 9:14 am
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Expectacular Pato! Que especies utilizaste para el invitro?

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Lun Ago 22, 2011 12:01 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Que bueno Pato! Pareces un científico...Esperemos que no se contamine el otro 50%.
Estás probando con semillas y tejido?


Lun Ago 22, 2011 12:37 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Felicitaciones!!! de paso conseguite el medio,hay varios ,para orquideas ,suerte.

http://orquideofiloarg.foroargentina.ne ... t=in+vitro

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Lun Ago 22, 2011 1:24 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Gracias a todos!!
Citar:
¿como esterilizaste la caja de acrílico?

La caja la puse en la cocina sobre el marmol la noche anterior a hacer el cultivo, utilice agua oxigenada y alcohol para limpiar bien el marmol y toda la caja de acrilico, despues lo selle con film hasta su uso.

Citar:
Expectacular Pato! Que especies utilizaste para el invitro?

Utilce tejido de heliamphora nutans, darlingtonia, cephalotus, nepenthes rafflesiana, venus cup trap, venus shark tech y semillas de nepenthes tobaica y D. regia



Citar:
Que bueno Pato! Pareces un científico...Esperemos que no se contamine el otro 50%.
Estás probando con semillas y tejido?

Gracias San!, si puse las dos cosas! aparentemente el resto esta llendo bien, se ve que la esterilizacion de los frascos y medio estuvieron bien esterilizados, solo se contaminaron los que tenian tejidos como Darlligns y heliamphoras , ya a las cinco horas de haberlos puestos los tejidos se habian puesto marrones al toque. Asi que para la proxima voy a seleccionar mejor los tejidos que esten en mejores condiciones.

Citar:
Felicitaciones!!! de paso conseguite el medio,hay varios ,para orquideas ,suerte.

Si se que hay varios y son para carnivoras , ya los tengo!!

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Lun Ago 22, 2011 2:25 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Hola Pato, felicitaciones!!!
Yo trabajo en microbiologia, lo que podes hacer es introducir un mechero en la cabina, de esa forma logras un ambiente mas aseptico.
Saludos!! :idea:


Lun Ago 22, 2011 2:31 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Gracias Asdru!
Si puse dos mecheros!! me olvide de comentar!

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Lun Ago 22, 2011 2:32 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Pato Groso a Full vamos que sale la reproducción en masa de plantas made in Argentina ;)

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Lun Ago 22, 2011 5:20 pm
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Nota Re: Mi Primer cultivo Invitro
Que buen trabajo Pato¡¡¡ admiro tu capacidad¡¡ :D


Lun Ago 22, 2011 5:55 pm
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